1溶劑的純化

在液相色譜分析中,正相色譜以已烷作為流動(dòng)相的主體,二氯甲烷、氯仿、乙醚作為改性劑;反相色譜以水作為主體,以甲醇、乙腈、四氫呋喃作為改性劑。hplc分析均應(yīng)使用hplc級(jí)純度的溶劑,ar級(jí)的溶劑可能會(huì)由于雜質(zhì)的存在而出現(xiàn)鬼峰。

正相色譜分析中使用的己烷、二氯甲烷、氯仿、乙醚中經(jīng)常含有微量的水分,這會(huì)改變液固色譜柱的分離性能,使用前應(yīng)用球形分子篩柱脫去水分。反相色譜分析中使用的甲醇、乙腈、四氫呋喃,不必脫除微量水,但甲醇、乙腈等使用前經(jīng)硅膠柱凈化,去除具有紫外吸收的雜質(zhì)。

要保證配制流動(dòng)相用水的純度足夠高。由于去離子水通常含有一些有機(jī)物,所以不適合用于hplc分析用,使用超純水(電阻率18mω. cm)。如果條件有限,可將去離子水再次蒸餾,現(xiàn)用現(xiàn)蒸,保持新鮮,還能脫去co2,使用效果也不錯(cuò)。

2緩沖溶液

有些分析需要用到緩沖鹽的流動(dòng)相,配制時(shí)鹽試劑要用ar級(jí)以上、沒(méi)有污染、過(guò)期;現(xiàn)用現(xiàn)配,不要儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng),避免ph值發(fā)生變化和成分分解, 影響色譜分離的效果。緩沖鹽的流動(dòng)相能在實(shí)驗(yàn)室自己配制,商品化的流動(dòng)相可能會(huì)添加有硫代硫酸鈉穩(wěn)定劑,會(huì)影響緩沖液的光學(xué)和色譜性能。

3過(guò)濾

無(wú)論是有機(jī)水溶液還是緩沖鹽溶液的流動(dòng)相,配好后都要通過(guò)0. 45μm濾膜過(guò)濾后再上機(jī)使用,這樣能夠有效防止由于微粒的存在使流路管道堵塞。過(guò)濾后應(yīng)把溶劑放在密閉容器中,以防止被重新污染。過(guò)濾后的溶液既可用于 色譜分析,也可用于清洗諸如泵頭、柱塞桿、單向閥和密封圈等儀器部件,保持輸液泵的性能良好。

4脫氣

所有的流動(dòng)相在進(jìn)入hplc系統(tǒng)之前都應(yīng)該首先脫氣(即使儀器上有在線脫氣),因?yàn)闆](méi)有脫氣的流動(dòng)相進(jìn)入到高壓系統(tǒng)后,存在的氣泡會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)的 流速和壓力不穩(wěn)定,出現(xiàn)鬼峰等問(wèn)題。從溶液中排除氣泡的方法主要有:真空脫氣、氦氣脫氣和超聲波脫氣,實(shí)際工作中真空抽濾的方法很有效,它既能脫氣又能過(guò) 濾,但必須在上機(jī)前完成。在線連續(xù)脫氣可以防止氣體隨溫度的變化重新溶解在溶劑中。

5流動(dòng)相的化學(xué)特性

流動(dòng)相一般不要使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶液。因?yàn)閜h值過(guò)高或過(guò)低會(huì)損壞輸液泵中的密封圈和柱塞桿,除非流路需要鈍化(用2mol/l的硝酸溶液),也應(yīng)用后立即用純水沖凈。

在使用含水較高的流動(dòng)相時(shí),應(yīng)注意不同色譜柱使用方面的限制,因?yàn)閭鹘y(tǒng)的烷基鍵合固定相在有機(jī)溶劑含量低于5%的流動(dòng)相中容易發(fā)生碳鏈斷裂。一些新型鍵合固定相可以在純水為流動(dòng)相的條件下使用。

等度液相色譜分析儀的驗(yàn)收指標(biāo)

1.流量正確度：設(shè)置流量為1.0mL/min，用一個(gè)干燥的10mL容量瓶（稱重好的）接留出液，一接開始記時(shí)，正確裝滿10mL停止。再往稱量，得到水的重量。水的重量除時(shí)間即是流量正確度。

2.流量精度：照流量正確度連續(xù)測(cè)定幾次計(jì)算RSD。

3.檢測(cè)器基線噪聲：停留活動(dòng)相一個(gè)小時(shí)，選擇響應(yīng)zui大的峰為結(jié)果。

4.檢測(cè)器基線漂移：停留活動(dòng)相一個(gè)小時(shí)，從開始到結(jié)束看上下漂移zui大的為結(jié)果。

5.重現(xiàn)性：做整臺(tái)儀器的重現(xiàn)性，用甲醇做活動(dòng)相，工程師帶的色譜柱、標(biāo)準(zhǔn)品，反復(fù)進(jìn)樣幾次測(cè)試峰面積的RSD。

6.進(jìn)樣量正確度：分別進(jìn)20、40、60、80、100uL看線性。

7.交叉污染：進(jìn)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品后在進(jìn)個(gè)空缺看污染情況。